产品货号：
KL240606
中文名称：
2×染料法qPCR MasterMix(大肠杆菌专用)
英文名称：
2×E.coli SYBR qPCR MasterMix
产品规格：
1mL
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
产品特点：
产品组成：
保存：-20℃，避光，有效期1年。
使用方法：
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大肠杆菌专用2×SYBR qPCR MasterMix是基于荧光染料检测的即用型PCR预混试剂，可以对靶片段进行实时定量PCR分析。产品含有经过优化的缓冲液组分、Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2及SYBR Green I等所有实时定量PCR所需要的成分，用户只需加入模板和引物即可进行实时定量PCR反应，具有广泛的用途。
产品特点：
- 方便，用户只需准备模板和引物即可以进行实时定量PCR实验。
- 产品为2×预配液，操作步骤已经最大限度地简化，能减少污染，降低实验误差。
- 本制品不含大肠杆菌基因组DNA，在使用关于大肠杆菌的引物对，或针对细菌的通用引物对进行检测时不会出现假阳性。
- 扩增效率和灵敏度更高。
- 快捷，即用型的预配液使加样操作步骤简化，避免了交叉污染，降低实验误差。
- 各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。
产品组成：
| 组分 | 规格 |
| 2×染料法qPCR MasterMix(大肠杆菌专用) | 1mL |
| 说明书 | 1份 |
保存：-20℃，避光，有效期1年。
使用方法：
- 如果有N个样品（最好含一个样本制备阳性对照和一个样本制备阴性对照）并且做定量分析，最好设置N+7个反应，多出的7个中，6个用于6点标准曲线，一个是扩增阴性对照（NC）。在N+7个PCR管中，加入下列成分。如果是做定性分析，则6个做标准曲线的样品缩减成一个扩增阳性对照（PC），用户自己需要根据下表进行适当修改（把6个标曲反应改成1个阳性对照反应）。
成分 N个样品管 6个标准曲线管 NC管 2×染料法qPCR MasterMix(大肠杆菌专用) 各10μL 各10μL 10μL 自备引物1(10μM) 各1μL 各1μL 1μL 自备引物2(10μM) 各1μL 各1μL 1μL 自备基因组DNA模板 10～100ng - - 或自备cDNA模板 1～10ng - - 自备阳性对照模板（6个梯度） - 各1μL - 阴性对照模板(一般用水) - - 1μL 自备50×ROX 各0.4μL/- 各0.4μL/- 0.4μL/- 超纯水 至20μL 至20μL 至20μL - 放入荧光PCR仪中进行扩增，下表的扩增参数仅供参考。
循环步骤 反应参数 备注 预变性 95℃ 5分钟 PCR反应
(35～45次循环)94℃ 10秒 55～65℃ 15～30秒 靶分子长度最好在80～200bp 72℃ 40秒 采集SYBR通道的信号 溶解曲线分析 按qPCR仪器手册执行 - 通过溶解曲线分析的结果排除无效数据。有Ct值，但Tm值跟扩增阳性对照Tm不一样的样品（包括对照和待测样品），归为假阳性，数据无效，不予以分析。Tm跟扩增阳性对照Tm一致的，为有效Ct。
- 如果两种阴性对照（样本制备阴性对照和扩增阴性对照）的溶解曲线所得Tm值跟扩增阳性对照的Tm值一样，说明环境或试剂可能有过去的PCR扩增产物污染，则此次实验无效，需要解决污染问题再进行实验。
- 如果两种阴性对照（样品制备阴性对照和PCR阴性对照）是假阳性，可以继续分析其它样品有效数据。
- 对定量检测，以6个标准曲线样品的浓度的log值为横轴，以有效Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的有效Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再换算出待测样品的DNA浓度。
- 对定性检测，则得到有效Ct值的样本为阳性，无有效Ct值的为阴性。
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